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不同采集地何首乌的质量评价

作者：傅军作者单位：中山大学生命科学学院，广东广州 510275
【摘要】目的以2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷为指标评价不同采集地何首乌的质量。方法 HPLC法，色谱柱为 C18，流动相为乙腈水（体积比25∶75），检测波长320 nm。结果 2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷在0.2460～2.460 μg范围内线性良好（r=0.9999），平均回收率为99.5%（RSD=2.0%）。结论为何首乌质量评价提供了新的指标和方法。

【关键词】何首乌 2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷质量评价

　　Quality evaluation for Radix Polygonum Multiflori from different habitats

　　FU Jun, YAN Hanjing, LIANG Congqing, LIANG Jizhi

　　1.Sun Yatsen University University, Guangzhou 510275,China;

　　2.Guangdong College of Pharmacy, Guangzhou 510006,China;

　　3. Guangzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou 510130,China

　　Abstract:Objective To evaluate the qualities of Radix Polygonum Multiflori, a Chinese traditional herb, from different habitats. Methods 2,3,5,4′tetrahydroxystilbene2 OβDglycoside in the extracts of Radix Polygonum Multiflori was used a quality index of the herb. The content of the compound was analyzed on a C18 HPLC column. The mobile phase consisted of acetonitrile-water(25∶75)，and the detection wavelength was at 320 nm．Results The calibration curve was linear in the range of 0.2460～2.460 μg(r=0.9999) for the glycoside. The average recovery was 99.5% (RSD=2.0%). Conclusion This method could be used for the quality evaluation of Radix Polygonum Multiflori from different habitats.

　　Key words:Radix Polygomi Multiflori; 2,3,5,4′tetrahydroxystilbene2 OβDglycoside; assay

何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的块根［1］，主要含有蒽醌类、羟芪衍生物和磷脂类等化学成分。生品具解毒、消痈、润肠通便之功效，炮制品具补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨之功效［1］。由于野生资源紧缺，人工栽培品日益增多，对不同采集地何首乌的质量评价已引起广泛重视。我们以何首乌的主要活性成分之一且含量较高的2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷为指标，分析了10份不同采集地药材质量，为其质量评价提供新的指标。

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器

　　LC—10ATvp高效液相色谱仪（岛津），SPD—10ATvp紫外可见检测器（岛津），HW—2000色谱工作站。

　　1.2 试药

　　2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号110844—200404）；何首乌药材，由广东药学院中药学院药用植物与中药鉴定教研室提供并鉴定（见表1）。乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸水。表1 何首乌样品来源（略）

　　2 方法与结果

　　2.1 溶液制备

　　2.1.1 对照品溶液的制备

　　精密称取2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷对照品0.01230 g，置10 mL量瓶中，加稀乙醇适量，超声3 min使溶解，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加稀乙醇稀释到刻度，摇匀，即得（0.1230 mg·mL-1）。

　　2.1.2 供试品溶液的制备

　　取本品粉末（过四号筛）0.2 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，称重，加热回流30 min，放冷，称重，用稀乙醇补足失重，摇匀，静置，取上清液用0.45 μm滤膜滤过，即得。

　　2.2 色谱条件与系统适用性试验

　　色谱柱为DiamonsilTM C18（5 μm，250 mm×4.6 mm），流动相为乙腈水（体积比25∶75），流速为1.0 mL·min-1，检测波长320 nm。理论板数按2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷峰计算不低于4 000。见图1。

　　2.3 含量测定

　　2.3.1 标准曲线的制备

　　取对照品溶液2、6、8、10、12、16、20 μL进样，记录色谱图，以峰面积(A)对进样量（m）作线性回归，得回归方程为A=6.752×104+1.469×106m，r=0.9999，在0.2460～2.460 μg范围内线性良好。

　　2.3.2 精密度试验

　　取对照品溶液，连续重复进样6次，峰面积积分的RSD为1.1%。

　　2.3.3 重复性试验

　　取德庆何首乌粉末（过四号筛）共6份，照“2.1.2”项下的方法制备，依法测定。记录峰面积，2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷含量的RSD为1.3%。

　　2.3.4 回收率试验

　　取本品粉末（过四号筛）0.1 g，精密称定，分别精密加入对照品溶液（1.230 mg·mL-1）2.0、2.5、3.0 mL，照“2.1.2”项下的方法制备试验溶液，依法测定，计算，平均回收率为99.5%，RSD为2.0%。

　2.4 样品测定

　　取不同采集地药材样品，照“2.1.2”项下的方法制备供试品溶液，依法测定，记录峰面积，计算样品中2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷的含量。结果见表2。表2 样品测定结果（略）

　　2.5 聚类分析

首先对原始数据进行标准化处理:Xik′=(Xik-k)/Sik测定结果用SPSS11.0统计软件进行聚类分析，结果见图2。

　　3 讨论

　　3.1 实验结果显示，2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷含量最高达4.953%，最低为0.07033%；证实采集地的地理环境对药材质量有影响。据报道，不同生长环境和不同生长年限是影响2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷积累的重要因素［2］。

　　3.2 不同采集地的何首乌样品经聚类分析后可分为3类：①1号样品含量居首位，单独成为一类，符合我国中医界历来视广东德庆何首乌为道地药材的传统，我们对另一类有效成分蒽醌类的测定结果也支持这一观点（另文发表）；②2、4、5、6、7、8、9号样品聚在一起，其含量在2.866%～3.917%之间；③3、10号样品聚在一起，二者的含量均较低，其中采自广西田阳的10号样品经广西中医学院刘寿养教授鉴定为何首乌的变种棱枝何首乌，但中国植物志［3］认为其形态上的差异是栽培过程中的变化，仍应归属于何首乌。我们的研究结果显示该样品2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷含量与其他采集地样品含量存在较大差异，仅为1号样品的1.4%，按照中国药典的规定［1］是不能作为药用的。从化学角度看，支持将其另列为何首乌的变种。

【参考文献】
　　［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］. 北京：化学工业出版社，2005：123.

　　［2］李正，杭悦守，周义锋. 中国主要产区何首乌以二苯乙烯苷含量为指标的种质评价［J］. 林产化学与工业，2003，23（4）：37-41.

　　［3］中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志［M］.北京：科学出版社，1999:102-103.
　

摘自：http://journal.shouxi.net/html/qikan/dxxb/gdyxyxb/20066223/ylxyyyyx/20080831062457374_319412.html
2009-6-29

网页更新时间：2014/08/07